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技術文章 / article
談談DMEM細胞培養基在使用中有哪些需要注意的地方
2021-10-28 瀏覽次數：2007
今天小編給大家積極DMEM細胞培養基的使用注意事項：
加水：打開鍋蓋，向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠，防止過程中干鍋。
裝料、加蓋：材料放好后，關閉器蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。
排氣:打開排氣口,用電爐加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當有大量蒸汽排出時，維持5分鐘，使鍋內冷空氣*排凈。
升壓、保壓和降壓：當鍋內冷空氣排凈時，即可關閉排氣閥，壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時，控制電壓以維持恒溫，并開始計算時間，待時間達到要求(一般培養基和器皿控制在121攝氏度，20分鐘)后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由于瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。
后的DMEM細胞培養基空白培養：后放于37攝氏度培養箱中培養，經24小時培養無菌生長，可保存備用;斜面培養基取出后，立即擺成斜面后空白培養;半固體的培養基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后，空白培養。
干熱法：通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱。一般是把待的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至160至170攝氏度維持1至2銷售。
干熱法常用于空玻璃器皿、金屬器具的。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養基等都不能用此法。
前的準備：玻璃器皿等在前須經正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿于后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內;三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結扎緊，以防后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊須適中，管口外露的棉花纖維統一通過火焰燒去，時將吸管裝入金屬管筒內進行，也可用紙條斜著從吸管包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁并擰幾下，再將包好的吸管集中。
干燥箱：將包扎好的物品放入干燥烘箱內，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160至170攝氏度并恒溫1至2小時，注意勿使溫度過高，超過170攝氏度，器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿，溫度為120攝氏度持續30分鐘即可。溫度降至60至70攝氏度時方可打開箱門，取出物品，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。 用此法時，不能用油、蠟紙包扎物品。
火焰：直接用火焰灼燒，迅速。對于接種環，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行。此外，在接種過程中，試管或三角瓶口，也采用通過火焰而達到的目的。
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