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技術(shù)文章 / article
細胞生長緩慢的兩大根本原因
2022-06-27 瀏覽次數(shù)：1618
一、培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題
1.檢查你所培養(yǎng)的細胞是否存在污染。
（1）如果培養(yǎng)細胞未添加抗生素，細胞污染則是不可避免的。
① 用肉眼和顯微鏡進行檢查。
② 如果細胞被污染則要棄掉。
（2）由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測。
（3）檢測可能污染的途徑和原因。
2.檢查你用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基和血清（例如：是否批次不同或廠商不同）。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10×儲存液，而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1×液體，而隨后證明問題就出自于此。
3.如果問題與培養(yǎng)基無關(guān)，那么很可能還是細胞的問題。
（1）復(fù)蘇另一支凍存的細胞，并且與正在培養(yǎng)的細胞加以比較。兩種細胞的培養(yǎng)應(yīng)分開，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按（2）～（4）步的方法做排查:
（2）對傳代培養(yǎng)的細胞進行計數(shù)，并繪制生長曲線，與以前培養(yǎng)該細胞的資料進行比較，檢查是否有下列改變:
① 傳代時是否接種密度過低。
② 細胞傳代是否過于頻繁。
③ 傳代前細胞平臺期是否過長。
（3）是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號，檢查批號和供貨商。
（4）是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞，應(yīng)檢測:
① 胰蛋白酶（其他消化試劑）消化時間是否過長。
② 消化液的濃度和活性是否過高、過強。
③ 胰蛋白酶消化時，孵箱溫度是否過高。
④ 吹打消化細胞時是否過于用力。
⑤ 細胞是否對 EDTA過于敏感（如果添加了EDTA）。
⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。
⑦ 是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。
二、檢查共用的設(shè)備和試劑
溫室和孵箱溫度
（1）溫度和溫度設(shè)定不準。
① 自動調(diào)溫器損壞。
② 開關(guān)孵箱門過于頻繁。
③ 孵箱門未關(guān)緊。
④ 風扇損壞造成散熱不均。
（2）孵箱濕度不能維持
① 水盤中未加水。
② 孵箱有滲漏。
③ 開關(guān)孵箱門過于頻繁。
④ 在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBSA，每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。
（3）孵箱的CO2濃度不準
① 開關(guān)孵箱門過于頻繁。
② CO2控制器出現(xiàn)問題。
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