幾種常用的免疫學技術知識簡介

免疫學技術：是指在免疫學長期發展過程中形成的一套特別的研究手段和計數，包括人工免疫防治技術（疫苗和血清）和免疫檢測技術（抗原抗體檢測和機體免疫功能檢測）

免疫學研究涉及到的重要技術包括：單克隆抗體技術、T細胞克隆技術、轉基因及基因編輯技術、分子雜交技術、聚合酶鏈反應技術等。

常用的免疫學技術：

1．免疫熒光技術免疫熒光技術是利用熒光素標記的抗體（或抗原）檢測組織、細胞或血清中的相應抗原（或抗體）的方法.由于熒光抗體具有安全、靈敏的特點,因此已廣泛應用在免疫熒光檢測和流式細胞計數領域.根據熒光素標記的方式不同,可分為直標熒光抗體和間標熒光抗體.間標熒光抗體中一抗并不直接連接熒光素,而是先將一抗結合到蛋白,然后帶有熒光素的二抗再結合至一抗.通過二抗的結合,能將信號進行放大,因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度,但是隨之帶來的高背景也降低了檢測的特異性.近年來,隨著熒光素和熒光檢測技術的不斷進步,熒光檢測的靈敏度已經接近同位素檢測的水平,直接標記的熒光抗體逐漸取代間接標記抗體.這些標記了熒光素的抗體直接結合至抗原,大大提高了檢測的特異性,使檢測的結果更加準確可靠.熒光檢測技術的發展,使得免疫熒光技術在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查IgM抗體,做為近期接觸抗原的標志.利用單克隆熒光直接標記抗體鑒定淋巴細胞的亞類.通過流式細胞儀,針對細胞表面不同抗原,可以同時使用多種不同的熒光抗體,對同一細胞進行多標記染色.

2．放射免疫檢測放射免疫檢測技術是目前靈敏度最高的檢測技術,利用放射性同素標記抗原（或抗體）,與相應抗體（或抗原）結合后,通過測定抗原抗體結合物的放射性檢測結果.放射性同位素具有pg級的靈敏度,且利用反復曝光的方法可對痕量物質進行定量檢測.但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用.

3．酶聯免疫吸附試驗（ELISA）酶聯免疫檢測是目前應用廣泛的免疫檢測方法.該方法是將二抗標記上酶,抗原抗體反應的特異性與酶催化底物的作用結合起來,根據酶作用底物后的顯色顏色變化來判斷試驗結果,其敏感度可達ng水平.常見用于標記的酶有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶（AP）等.由于酶聯免疫法無需特殊的儀器,檢測簡單,因此被廣泛應用于疾病檢測.常用的方法有間接法、夾心法以及BAS－ELISA.間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內,然后依次加入一抗、標記了酶的二抗和底物顯色,通過儀器（例如酶標儀）定量檢測抗原.這種方法操作簡單但由于高背景而特異性較差.目前已逐漸被夾心法取代.夾心法利用二種一抗對目標抗原進行捕獲和固定,在確保靈敏度的同時大大提高了反應的特異性.近年來,抗原的定量檢測技術也不斷推陳出新.近年來,在夾心法ELISA的基礎上,開發了多抗原檢測試劑盒,能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量.這項技術的應用大大縮短了診斷的時間,提高診斷的可靠性和及時性.

4．免疫金膠體技術膠體金技術經過30多年的發展到現在已日趨成熟,該方法是將二抗標記上膠體金顆粒,利用抗原抗體間的特異性反應,最終將膠體金標記的二抗吸附于滲濾膜上,此方法簡單,快速,廣泛應用于臨床篩查.