細胞培養需要的胰酶和雙抗

細胞培養需要的胰酶和雙抗

胰酶和雙抗作為細胞培養過程中試劑的一部分，對細胞培養成功與否存在著關鍵的作用。但是對于胰酶和雙抗的基礎知識還是要多多了解的，不然就有可能禍禍你的細胞哦！

胰酶

胰酶是什么？

胰酶是一種解離試劑，本質是可以降解蛋白的酶，生物學實驗中常用來把貼壁細胞從貼壁面解離下來和使細胞解聚，也可以用于原代細胞的傳代過程中分散組織。

胰酶使用的濃度是多少？

胰酶濃度：常見濃度為0.25%的胰酶（含有螯合劑），半貼壁細胞或者對胰酶敏感的細胞，可采用0.05%濃度的胰酶（含有或者不含有螯合劑）進行細胞消化。

為什么收到的胰酶會有顏色差異？

商品化胰酶溶液需要用干冰運輸，在運輸過程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換，導致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運輸過程中導致的PH值的變化很小，PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時呈淡黃色的。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。這種顏色的變化是行業普遍現象，在不同供應商的胰酶產品都會出現。

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？

簡單一個字：能

對于胰酶呈黃色的問題，不同品牌也都對此現象進行了測試實驗。變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離，請放心使用。

細胞消化時，胰酶不去除對細胞的影響

細胞消化時，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。

如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一種化學螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯合使用可提高消化效率，所以常二者合用。

胰酶的保存

胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長，胰酶的消化能力減弱。由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會自己剪切自己，建議胰酶不要反復凍融，拿到手中的大瓶胰酶進行分裝使用。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。

雙抗

什么是雙抗？

雙抗就是青鏈霉素混合液(100X) ，是專門用于細胞培養的，可以直接添加到細胞培養液內。

雙抗作用是什么？

雙抗起的作用：抗生素，抑制細菌生長；避免細胞污染。

培養液中需要加入雙抗嗎？

加不加雙抗不是的，視實際情況而定。

如果你實驗室條件足夠好，如果你操作足夠規范，就盡量不要加雙抗了。相反，如果你實驗條件不夠，操作也沒有把握，還是加的好。的方法是做個實驗對照，看有沒有必要加雙抗。

如何加入雙抗？

在細胞培養液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。

如果加多了話對細胞毒性太大，細胞生長艱難。加入雙抗時，一般先加在培養基里，因為如果是直接在換液傳代滴加的話，那個雙抗的濃度實在不好控制。

誤區：長期使用抗生素，以對抗污染

細胞培養時不應常規使用抗生素

連續使用抗生素會促進抗生素耐藥性細胞株的產生，導致輕度污染持續存在，一旦將抗生素從培養基中去除，這種輕度污染zui終將發展成大規模污染

連續使用抗生素會掩蓋支原體感染及其他隱性污染

有些抗生素會與細胞發生交叉反應，干擾您研究的細胞過程

雙抗的保存

雙抗通常情況下在-20℃保存一年。由于該試劑在4℃下長期存放是不穩定的，應分裝后在-20℃下避光保存。青霉素在2-8的℃存放時間不應超過4天，鏈霉素相對穩定一點，在2-8℃可以存放30天左右。切記，雙抗從凍融后里面的基本成分已開始降解。